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WST650-2019抗菌和抑菌效果評(píng)價(jià)方法

公司簡介
健明迪檢測提供的WST650-2019抗菌和抑菌效果評(píng)價(jià)方法,抗抑菌產(chǎn)品檢測新標(biāo)準(zhǔn)WST650-2019抗菌和抑菌效果評(píng)價(jià)方法于2019年7月1日起實(shí)施,健明迪檢測準(zhǔn)確把握消毒政策要求變化,提供抗抑菌劑等消毒產(chǎn)品產(chǎn)品檢測備案


推薦閱讀:抗菌制品檢測 5.2抗菌效果
5.2.1懸液定量殺菌試驗(yàn)
5.2.1.1適用范圍
適用于液體抗菌產(chǎn)品(如液體抗菌液、抗菌噴霧劑等)對(duì)微生物抗菌效果的測定。
5.2.1.2試劑、培養(yǎng)基及器材
中和劑(用PBS配制),其它見5.1.1.2。
5.2.1.3菌懸液配制
取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下,用PBS稀釋至約5.0×105CFU/mL~4.5×106CFU/mL菌懸液備用。
5.2.1.4中和劑鑒定試驗(yàn)
5.2.1.4.1分組
第1組:5.0mL中和劑+0.1mL菌懸液→培養(yǎng)
第2組:(0.5mL抗菌劑+4.5mL中和劑)+0.1mL菌懸液→培養(yǎng)
第3組:5.0mL稀釋液+0.1mL菌懸液→培養(yǎng)
第4組:稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基→培養(yǎng)
5.2.1.4.2步驟
根據(jù)試驗(yàn)分組,準(zhǔn)備試管和平皿,進(jìn)行編號(hào)。
第1組:取5.0mL中和劑,置20℃±1℃水浴中10min后,加入0.1mL試驗(yàn)菌懸液,混勻,作用10min,用中和劑做10倍系列稀釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個(gè)平皿中,做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第2組:取4.5mL中和劑于試管內(nèi),加入0.5mL抗菌劑,混勻,置20℃±1℃水浴中10min制成中和產(chǎn)物,加入0.1mL試驗(yàn)菌懸液,混勻,作用10min,用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個(gè)平皿中,做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第3組:取5.0mLPBS,置20℃±1℃水浴中10min,加入0.1mL試驗(yàn)菌懸液,混勻,作用10min,用PBS做10倍系列稀釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個(gè)平皿,做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第4組:分別吸取稀釋液(PBS)、中和劑各1.0mL于同一無菌平皿內(nèi),倒入上述試驗(yàn)同批次的培養(yǎng)基15mL~20mL,作為陰性對(duì)照組培養(yǎng)觀察。
5.2.1.4.3結(jié)果判定
第1、2、3組有相似量試驗(yàn)菌生長,且菌量在1.0×104CFU/mL~9.0×104CFU/mL;計(jì)算組間菌落數(shù)誤差率,其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過15%;第4組無菌生長,否則,說明試劑有污染,應(yīng)更換無污染的試劑重新進(jìn)行試驗(yàn)。
試驗(yàn)重復(fù)3次,每次試驗(yàn)均應(yīng)符合以上要求。
5.2.1.5試驗(yàn)步驟
取無菌試管,先加入5.0mL抗菌劑(說明書規(guī)定的使用濃度),置20℃±1℃水浴中5min后,再加入0.1mL試驗(yàn)用菌懸液,迅速混勻并立即計(jì)時(shí)。
待試驗(yàn)菌與抗菌劑相互作用至各預(yù)定時(shí)間(以說明書規(guī)定時(shí)間為T,時(shí)間分別為0.5T,T,1.5T),分別吸取0.5mL試驗(yàn)菌與抗菌劑混合液加于4.5mL中和劑中,混勻。
各管試驗(yàn)菌與抗菌劑混合液經(jīng)中和劑作用10min后,分別吸取1.0mL樣液,按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測定存活菌數(shù),每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時(shí),可用PBS進(jìn)行10倍系列稀釋后,再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
同時(shí)用PBS代替消毒液,進(jìn)行平行試驗(yàn),作為陽性對(duì)照。陽性對(duì)照回收菌落數(shù)在1.0×104CFU/mL~9.0×104CFU/mL。取同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。
所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng),對(duì)細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察最終結(jié)果;對(duì)白色念珠菌需培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次,計(jì)算殺菌率。
5.2.1.6結(jié)果判定
說明書規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥90%,判有抗菌作用;說明書規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥99%,判為較強(qiáng)抗菌作用。

5.2.2載體浸泡定量殺菌試驗(yàn)
5.2.2.1適用范圍
適用于粘稠狀(半固體)抗菌產(chǎn)品如抗菌洗手液、抗菌沐浴露、抗菌凝膠、膏狀抗菌產(chǎn)品等對(duì)微生物抗菌效果的鑒定。
5.2.2.2試劑、培養(yǎng)基及器材
中和劑(PBS配制),其它見5.1.2.2。
5.2.2.3染菌載體制備
取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下,用PBS稀釋至約5×106CFU/mL~5×107CFU/mL制成菌懸液備用。用微量移液器滴染10μl菌懸液于滅菌載體上,36℃±1℃烘干或室溫晾干備用。
5.2.2.4中和劑鑒定試驗(yàn)
5.2.2.4.1試驗(yàn)分組
第1組:5.0mL中和劑+染菌載體→培養(yǎng)
第2組:(含抗菌劑的載體+5.0mL中和劑)+染菌載體→培養(yǎng)
第3組:5.0mL稀釋液+染菌載體→培養(yǎng)
第4組:稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基→培養(yǎng)
5.2.2.4.2試驗(yàn)步驟
根據(jù)試驗(yàn)分組,準(zhǔn)備試管和平皿,依次進(jìn)行編號(hào)。
第1組:取5.0mL中和劑于無菌平皿中,置20℃±1℃水浴5min,加入1片染菌載體,作用10min,取出菌片放入5.0mL中和劑試管內(nèi),作用10min后,置渦旋振蕩器上振蕩1min或在手掌上用力振打80次,將試驗(yàn)菌洗下,用中和劑做10倍系列稀釋后,選擇適宜稀釋度,分別吸取1.0mL接種于2個(gè)平皿中,做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第2組:取5.0mL中和劑于無菌平皿內(nèi),加入1片沾有抗菌樣本的載體,混勻,置20℃±1℃水浴作用10min制成中和產(chǎn)物。再用無菌鑷子取1片染菌載體,浸于中和產(chǎn)物中作用10min后,用無菌鑷子取出染菌載體移入含5.0mL中和產(chǎn)物試管中,作用10min,振蕩,將試驗(yàn)菌洗下,用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個(gè)平皿中,做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第3組:取5.0mLPBS于無菌平皿中,置20℃±1℃水浴5min,加入1片染菌載體,作用10min,取出菌片放入5.0mLPBS試管內(nèi),作用10min后,振蕩,將試驗(yàn)菌洗下,用PBS做10倍系列稀釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個(gè)平皿中,做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第4組:分別吸取稀釋液(PBS)與中和劑各1.0mL于同一無菌平皿內(nèi),倒入同批次的培養(yǎng)基15~20mL,培養(yǎng)觀察。
5.2.2.4.3結(jié)果判定
第1、2和3組有相似量試驗(yàn)菌生長,且菌量在1.0×104CFU/片~9.0×104CFU/片。計(jì)算組間菌落數(shù)誤差率,其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過15%。第4組無菌生長,否則,說明試劑有污染,應(yīng)更換無污染的試劑重新進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)重復(fù)3次,每次試驗(yàn)均應(yīng)符合以上要求。
5.2.2.5試驗(yàn)步驟
按5g/片的量稱取抗菌樣品于無菌平皿內(nèi),置20℃±1℃水浴5min,用無菌鑷子取染菌載體,使載體完全浸沒于抗菌樣品中,立即計(jì)時(shí)。
待染菌載體與抗菌劑相互作用至各預(yù)定時(shí)間(以說明書規(guī)定時(shí)間為T,時(shí)間分別為0.5T,T,1.5T),分別取染菌載體加入5.0mL中和劑試管中,混勻。
經(jīng)中和劑作用10min后,振蕩,將試驗(yàn)菌洗下,分別吸取1.0mL樣液,按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測定存活菌數(shù),每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時(shí),可用PBS進(jìn)行系列10倍稀釋后,再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
取與試驗(yàn)樣品同質(zhì)材料不含抗菌成分的對(duì)照樣品代替抗菌樣品浸泡2片染菌載體,進(jìn)行平行試驗(yàn),作為陽性對(duì)照。陽性對(duì)照回收菌量為1.0×104CFU/片~9.0×104CFU/片。取同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。
所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng),細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察結(jié)果;白色念珠菌培養(yǎng)72h觀察結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次,計(jì)算殺菌率。
5.2.2.6結(jié)果判定
說明書規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥90%,判有抗菌作用;說明書規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥99%,判有較強(qiáng)抗菌作用。
5.2.3載體殺菌試驗(yàn)
5.2.3.1適用范圍
適用于添加有殺菌劑的衛(wèi)生濕巾或可溶性抗菌物質(zhì)的載體類產(chǎn)品的抗菌性能效果的鑒定。
5.2.3.2試劑、培養(yǎng)基及器材
中和劑(PBS配制),其它見5.1.1.2
5.2.3.3菌懸液配制及樣片制備
取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下,用PBS稀釋至1.0×105CFU/mL~9.0×105CFU/mL,制成菌懸液備用。
用無菌剪刀將抗菌產(chǎn)品和材質(zhì)相同但不含抗菌成分的對(duì)照樣品分別剪成20mm×30mm樣片備用。試驗(yàn)時(shí)滴加0.1mL菌懸液。對(duì)照樣片染菌前需經(jīng)121℃15min滅菌處理。
5.2.3.4中和劑鑒定試驗(yàn)
5.2.3.4.1試驗(yàn)分組
第1組:5.0mL中和劑+染菌對(duì)照樣片→培養(yǎng)
第2組:(5.0mL中和劑+抗菌樣片)+染菌對(duì)照樣片→培養(yǎng)
第3組:5.0mL稀釋液+染菌對(duì)照樣片→培養(yǎng)
第4組:稀釋液+中和劑+培養(yǎng)基→培養(yǎng)
5.2.3.4.2試驗(yàn)步驟
根據(jù)試驗(yàn)分組,準(zhǔn)備試管和平皿,依次進(jìn)行編號(hào)。
第1組:取5.0mL中和劑于無菌試管內(nèi),置20℃±1℃水浴5min,用無菌鑷子取1片染菌對(duì)照樣片加入試管內(nèi),作用10min,振蕩將試驗(yàn)菌洗下,用中和劑做10倍系列稀釋后選擇適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種于2個(gè)平皿中,做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第2組:取5.0mL中和劑于無菌試管內(nèi),用無菌鑷子取1片抗菌樣片加入試管內(nèi),振蕩混勻置20℃±1℃水浴作用10min制成中和產(chǎn)物,再夾入1片染菌對(duì)照樣片,作用10min,振蕩將試驗(yàn)菌洗下,用中和產(chǎn)物做10倍系列稀釋,選擇適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個(gè)平皿,做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第3組:取5.0mLPBS于無菌試管內(nèi),置20℃±1℃水浴5min,用無菌鑷子取1片染菌對(duì)照樣片加入試管內(nèi),作用10min,振蕩將試驗(yàn)菌洗下,用PBS做10倍系列稀釋后選擇適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個(gè)平皿,做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
第4組:分別吸取稀釋液與中和劑各1.0mL于同一無菌平皿內(nèi),傾注同批次的培養(yǎng)基15mL~20mL,培養(yǎng)觀察。
5.2.3.4.3結(jié)果判定
第1、2和3組有相似量試驗(yàn)菌生長,且菌量在1.0×104CFU/片~9.0×104CFU/片。計(jì)算組間菌落數(shù)誤差率,其組間菌落數(shù)誤差率應(yīng)不超過15%。第4組無菌生長,否則,說明試劑有污染,應(yīng)更換無污染的試劑重新進(jìn)行試驗(yàn)。
試驗(yàn)重復(fù)3次,每次試驗(yàn)均應(yīng)符合以上要求。
5.2.3.5試驗(yàn)步驟
取無菌平皿,用無菌鑷子取3片試驗(yàn)樣片,勿重疊,置20℃±1℃水浴5min,在每一樣片上滴加0.1mL試驗(yàn)用菌懸液,立即計(jì)時(shí)。
待試驗(yàn)菌與樣片相互作用至各預(yù)定時(shí)間(以說明書規(guī)定時(shí)間為T,時(shí)間分別為0.5T,T,1.5T),分別夾取染菌樣片加于5.0mL中和劑試管中,混勻。
經(jīng)中和劑作用10min后,振蕩將試驗(yàn)菌洗下,分別吸取1.0mL樣液,按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測定存活菌數(shù),每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時(shí),可10倍系列稀釋后,再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。
同時(shí)用不含殺菌成分,其他成分相同的對(duì)照樣片2片代替試驗(yàn)樣片,進(jìn)行平行試驗(yàn),作為陽性對(duì)照。陽性對(duì)照回收菌落數(shù)在1.0×104CFU/片~9.0×104CFU/片。取試驗(yàn)同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。
所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng),細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h、白色念珠菌需培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次,計(jì)算殺菌率。
5.2.3.6殺菌率計(jì)算
見5.2.2.6。
5.2.3.7結(jié)果判定
說明書規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥90%,判有抗菌作用;說明書規(guī)定時(shí)間的殺菌率≥99%,判有較強(qiáng)抗菌作用。

5.2.4浸漬殺菌試驗(yàn)
5.2.4.1適用范圍
適用于抗菌毛巾、抗菌棉襪、抗菌棉布、抗菌紗布口罩等含有溶出性抗菌材料的抗菌織物對(duì)微生物抗菌效果的試驗(yàn)。
5.2.4.2試劑、培養(yǎng)基及器材
中和劑(PBS配制,針對(duì)樣品中所含可溶性抗菌成分進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn)),其它見5.1.5.2
5.2.4.3試驗(yàn)步驟
分別取1mL菌懸液加入2份準(zhǔn)備好的錐形瓶內(nèi)試樣和1份對(duì)照織物上,確保其均勻分布,且錐形瓶中不留多余液,封好瓶口,以防蒸發(fā),造成細(xì)菌死亡。
分別在一個(gè)盛有已接種菌懸液的試樣和對(duì)照織物的錐形瓶中加入100mL中和劑,置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細(xì)菌,取1.0mL做10倍系列稀釋,選適當(dāng)稀釋度以傾注法接種平皿,作為“0”接觸時(shí)間樣本和對(duì)照織物上的細(xì)菌數(shù)。
將另一個(gè)裝有已接種菌懸液試樣的錐形瓶于36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h,加入100mL中和劑,置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細(xì)菌,取1.0mL做10倍系列稀釋,選適當(dāng)稀釋度以傾注法接種平皿,作為試驗(yàn)組。
陰性對(duì)照組:試樣不接種菌懸液,在“0”接觸時(shí)間加入100mL中和劑,置渦旋振蕩器上振蕩1min取樣,接種平皿。
陽性對(duì)照組:另取1個(gè)裝有對(duì)照織物的錐形燒瓶,接種1mL菌懸液后,在36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h,加入100mLPBS,置渦旋振蕩器上振蕩1.0min洗滌細(xì)菌,取1.0mL做10倍系列稀釋,選適當(dāng)稀釋度以傾注法接種平皿。
將陰性和陽性對(duì)照樣本與試驗(yàn)組樣本一并放36℃±1℃培養(yǎng)48h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)。試驗(yàn)重復(fù)3次。
5.2.4.4結(jié)果判定
“0”接觸時(shí)間對(duì)照織物的平均菌落數(shù)應(yīng)在1.0×103CFU/mL~5.0×103CFU/mL。
陰性對(duì)照應(yīng)無菌生長,陽性對(duì)照菌數(shù)比0接觸時(shí)間的菌數(shù)明顯增加。
各次試驗(yàn)的殺菌率均≥90%,即可認(rèn)定該樣品具有抗菌作用;殺菌率≥99%,判有較強(qiáng)抗菌作用。

5.2.5振蕩燒瓶試驗(yàn)
5.2.5.1適用范圍
適用于添加有非溶出性抗菌物質(zhì)的抗菌產(chǎn)品對(duì)微生物抗菌效果的鑒定。
注1:在進(jìn)行振蕩燒瓶試驗(yàn)前,需要鑒定其抗菌成分是否可溶出,如果有溶出性抗菌材料,參照可溶出抗菌材料檢測,無溶出性抗菌材料,可選用振蕩燒瓶法進(jìn)行。
注2:非溶出性抗菌材料的鑒定:將樣品置于無菌蒸餾水浸泡24h,取浸泡液參照5.1.1檢驗(yàn)是否有抑菌效果,或?qū)悠凡贸芍睆?mm圓片參照5.1.4檢驗(yàn)是否有抑菌環(huán)。如果無抑菌效果,說明樣品屬非溶出性抗菌材料,進(jìn)行振蕩燒瓶試驗(yàn)。
5.2.5.2試劑、培養(yǎng)基及器材
搖床,天平,其它見5.1.1.2
5.2.5.3試驗(yàn)步驟
5.2.5.3.1對(duì)于抗菌無紡布口罩、衛(wèi)生巾、衛(wèi)生護(hù)墊、尿布、尿不濕、無紡布一次性內(nèi)褲等產(chǎn)品,對(duì)微生物抑菌效果的試驗(yàn)方法參照GB15979進(jìn)行。
結(jié)果判定:不加樣片組的菌落數(shù)在1.0×104CFU/mL~9.0×104CFU/mL,且樣品振蕩前后平均菌落數(shù)差值在10%以內(nèi),試驗(yàn)有效;被試樣片組抑菌率與對(duì)照樣片組抑菌率的差值≥26%,判產(chǎn)品具有抗菌作用。
5.2.5.3.2對(duì)于抗菌毛巾、抗菌棉襪、抗菌棉布、抗菌紗布口罩等含非溶出性抗菌材料的針織類抗菌織物對(duì)微生物抗菌效果按照FZ/T73023標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測和評(píng)價(jià)。

5.2.6貼膜試驗(yàn)
5.2.6.1適用范圍
適用于PE抗菌底模、PE打孔膜及PE抗菌包裝袋、抗菌塑料、抗菌地板、抗菌瓷磚等產(chǎn)品抗菌效果測定。通過將細(xì)菌污染于樣品表面,然后用塑料薄膜覆蓋,使細(xì)菌與樣品表面充分接觸,以測定其抗菌效果。
5.2.6.2試劑、培養(yǎng)基及試驗(yàn)器材
5.2.6.2.1試驗(yàn)菌株
金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、大腸桿菌(8099)、白色念珠菌(ATCC10231),也可根據(jù)抗菌用品特定用途選用其他菌株。
5.2.6.2.2試劑
pH7.2~7.4的0.03mol/LPBS,營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基,沙氏瓊脂培養(yǎng)基,沙氏液體培養(yǎng)基。
5.2.6.2.3試驗(yàn)器材
薄膜為不影響細(xì)菌生長和不吸水的材料,厚度不規(guī)定,使用面應(yīng)有較好的粘合性,邊長為40mm±2mm的正方形;無菌塑料袋、樣片:將試樣及對(duì)照試樣(與試樣同質(zhì)不含抗菌組分)分別制成邊長為50mm±2mm的正方形,其中抗菌樣片3個(gè),對(duì)照樣片6個(gè)。
5.2.6.3實(shí)驗(yàn)步驟
將試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下制成菌懸液。將菌懸液用1/500的營養(yǎng)肉湯稀釋成2.5×105CFU/mL~1.0×106CFU/mL試驗(yàn)用菌懸液。
將樣片試驗(yàn)面朝上放于無菌平皿中,取0.4mL菌懸液滴染于樣片中央,涂勻。薄膜覆蓋,小心觸壓薄膜,使菌液均勻散開,以免菌液溢出薄膜外。蓋上平皿蓋。同時(shí)取對(duì)照樣片放于無菌平皿中,取0.4mL菌懸液滴染于樣片中央,涂勻。按試驗(yàn)樣片方法用薄膜覆蓋,蓋上平皿蓋。
將裝有接種過菌液的試驗(yàn)樣片和對(duì)照樣片的平皿(3個(gè)抗菌樣片和3個(gè)對(duì)照樣片),置36℃±1℃、相對(duì)濕度不低于90%的條件下培養(yǎng)24h。
以無菌操作方式用鑷子將覆蓋膜和樣片放入無菌塑料袋中,然后加入10mL肉湯培養(yǎng)液,用手充分揉搓袋中的樣片和覆蓋薄膜,將細(xì)菌洗下。
吸取1mL洗下的菌液,取適當(dāng)稀釋度接種2個(gè)平皿,加入15mL~20mL營養(yǎng)瓊脂,待瓊脂凝固后,翻轉(zhuǎn)平皿使底向上,置36℃±1℃培養(yǎng)48h。
將另3個(gè)對(duì)照樣片“0”時(shí)間接種菌液后,立即用鑷子將覆蓋膜和樣片放入塑料袋中,洗脫和接種方法與試驗(yàn)樣片相同;以試驗(yàn)用同批次稀釋液接種培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照,試驗(yàn)重復(fù)3次。
5.2.6.4結(jié)果的計(jì)算與判定
5.2.6.5.1試驗(yàn)成立條件
各次試驗(yàn)陰性對(duì)照均無菌生長;對(duì)照樣片接種后直接求出活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值應(yīng):
式中:
L最大值—最大活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值;
L最小值—最小活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值;
L平均值—平均活菌數(shù)的對(duì)數(shù)值;
對(duì)照樣片“0”時(shí)間接種后的活菌數(shù)平均值不少于1.0×105CFU/樣片;覆蓋了薄膜的對(duì)照樣片培養(yǎng)24h后的活菌數(shù)不少于1.0×104CFU/樣片。
5.2.6.5.2結(jié)果判定
各次試驗(yàn)抗菌活性值均≥1.0,可判定該試樣具有抗菌作用;各次試驗(yàn)抗菌活性值均≥2.0,可判定該試樣具有較強(qiáng)抗菌作用。

5.2.7持續(xù)抗菌試驗(yàn)
5.2.7.1適用范圍
適用于具有長效抗菌作用產(chǎn)品抗菌效果的鑒定。
5.2.7.2試劑、培養(yǎng)基及器材
試驗(yàn)菌株:金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、大腸桿菌(8099)、黑曲霉菌(ATCC16404)等
載體:布片、玻片、不銹鋼片等
試劑:稀釋液(含0.01%吐溫80的0.03mol/L的PBS)、中和劑(PBS配制)、營養(yǎng)瓊脂、麥芽浸膏瓊脂等。
5.2.7.3試驗(yàn)步驟
5.2.7.3.1長效抗菌劑樣片的制備:
根據(jù)長效抗菌劑所用載體,如木板、金屬板、塑料板等裁成50mm×50mm,制備抗菌樣片。按照抗菌劑涂抹要求,將抗菌劑涂布于樣片表面,室溫干燥備用,作為實(shí)驗(yàn)組;未經(jīng)任何處理的樣片(經(jīng)壓力蒸汽滅菌處理)作為對(duì)照組;兩組樣片在室溫下存放于實(shí)驗(yàn)室。
5.2.7.3.2中和劑鑒定試驗(yàn)
以長效抗菌劑進(jìn)行中和劑鑒定試驗(yàn),方法見5.2.1.4。
5.2.7.3.3長效抗菌實(shí)驗(yàn)步驟
實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn):兩組樣片于室溫存放至長效抗菌劑說明書規(guī)定的持續(xù)作用時(shí)間(如7d,15d和30d等),后,取出實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組進(jìn)行試驗(yàn)。將24h新鮮培養(yǎng)的菌懸液染到載體上,實(shí)驗(yàn)組染菌載體作用至說明書規(guī)定時(shí)間后(如2.5min、5min、10min、20min等)投入中和劑中,混勻后稀釋接種;同時(shí)用對(duì)照組樣片染菌進(jìn)行平行試驗(yàn),對(duì)照組染菌載體在相同時(shí)間投入稀釋液中,混勻后稀釋接種。細(xì)菌繁殖體36℃±1℃培養(yǎng)48h、黑曲霉菌30℃±1℃培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果,對(duì)照載體染菌后的回收菌量在1.0×104CFU/片~9.0×104CFU/片。取試驗(yàn)同批次稀釋液、中和劑、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。試驗(yàn)重復(fù)3次,計(jì)算殺菌率。
現(xiàn)場實(shí)驗(yàn):選擇病房或其他公共場所表面作為試驗(yàn)現(xiàn)場,選擇相似場所一組作為對(duì)照組,一組作為實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組不做任何處理,試驗(yàn)組噴涂抗菌劑,對(duì)照組以常規(guī)方式清潔消毒,實(shí)驗(yàn)組噴涂抗菌劑后,日常僅清水擦拭,至規(guī)定時(shí)間(長效時(shí)間如7d,15d、30d)后進(jìn)行采樣。對(duì)照組用無菌棉簽沾稀釋液采樣,實(shí)驗(yàn)組用無菌棉簽沾中和劑采樣,采樣面積為50cm2,對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組均為30個(gè)樣本。所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本經(jīng)適當(dāng)稀釋接種后,36℃±1℃培養(yǎng)48h觀察結(jié)果,計(jì)算殺菌率。
5.2.7.4結(jié)果判定
殺菌率≥90%,判在該段時(shí)間內(nèi)具有持續(xù)抗菌作用。

以上內(nèi)容為WST 650-2019抗菌和抑菌效果評(píng)價(jià)方法政策文件的全部內(nèi)容,此政策實(shí)施日期,相關(guān)企業(yè)需要根據(jù)要求做好抗抑菌劑產(chǎn)品備案檢測,健明迪檢測,專注消毒產(chǎn)品備案,提供CMA資質(zhì)認(rèn)證檢驗(yàn)報(bào)告。

5.1抑菌效果
5.1.1懸液定量抑菌試驗(yàn)
5.1.1.1適用范圍
適用于液體抑菌制劑如衛(wèi)生洗液、抑菌噴霧劑等對(duì)微生物抑菌效果的測定。
5.1.1.2試劑、培養(yǎng)基及器材
5.1.1.2.1試驗(yàn)菌株
金黃色葡萄球菌(ATCC6538)、大腸桿菌(8099)、白色念珠菌(ATCC10231)及根據(jù)抑菌劑特定用途所用的其他菌株。
5.1.1.2.2試劑
稀釋液:0.03mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)(pH7.2~7.4),培養(yǎng)基:金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的培養(yǎng)使用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,白色念珠菌的培養(yǎng)使用沙氏瓊脂培養(yǎng)基。
5.1.1.2.3器材
恒溫水浴箱、計(jì)時(shí)器、Ⅱ級(jí)生物安全柜等。
5.1.1.3試驗(yàn)步驟
取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下,用PBS稀釋至約5.0×105CFU/mL~4.5×106CFU/mL菌懸液備用。取無菌試管,先加入5.0mL樣品(根據(jù)使用說明書要求使用原液或稀釋液),置20℃±1℃水浴中5min后,再加入0.1mL試驗(yàn)用菌懸液,迅速混勻并立即計(jì)時(shí)。待試驗(yàn)菌與樣品相互作用至說明書的規(guī)定時(shí)間,分別吸取1.0mL試驗(yàn)菌與樣品混合液接種2個(gè)平皿,傾注培養(yǎng)基。菌量無法計(jì)數(shù)時(shí),以PBS做10倍系列稀釋,選適宜稀釋度分別吸取1.0mL接種2個(gè)平皿,做活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。同時(shí)用PBS代替樣品,進(jìn)行平行試驗(yàn),作為陽性對(duì)照。陽性對(duì)照回收菌落數(shù)在1.0×104CFU/mL~9.0×104CFU/mL之間。取同批次PBS、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng),細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察最終結(jié)果;白色念珠菌培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次,計(jì)算抑菌率。
5.1.1.4結(jié)果判定
抑菌率≥50%~90%,判有抑菌作用;抑菌率≥90%,判有較強(qiáng)抑菌作用。

5.1.2載體浸泡定量抑菌試驗(yàn)
5.1.2.1適用范圍
適用于膏體或半固體凝膠類、黏稠狀抑菌產(chǎn)品對(duì)微生物抑菌效果的測定。
5.1.2.2試劑、培養(yǎng)基及器材
載體為10mm×10mm脫脂白平紋布片,脫脂方法依照《消毒技術(shù)規(guī)范》(2002版)進(jìn)行,使用前壓力蒸汽滅菌備用,電子天平(d=0.01g),其它同5.1.1.2。
5.1.2.3操作步驟
取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下,用PBS稀釋至約5.0×106CFU/mL~5.0×107CFU/mL制成菌懸液備用。用微量移液器滴染10μl菌懸液于滅菌載體上,36℃±1℃烘干或室溫晾干備用。
按5g/片的量稱取樣品于無菌平皿內(nèi),置20℃±1℃水浴5min,用無菌鑷子取染菌載體,使載體完全浸沒于樣品中,立即計(jì)時(shí)。待染菌載體與樣品相互作用至說明書的規(guī)定時(shí)間,分別取染菌載體加入5.0mLPBS試管中,混勻,振蕩,將試驗(yàn)菌洗下,分別吸取1.0mL樣液,按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測定存活菌數(shù),每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時(shí),可用PBS進(jìn)行10倍系列稀釋后,再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。取10.0g與試驗(yàn)樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的對(duì)照樣品浸泡2片染菌載體進(jìn)行平行試驗(yàn),作為陽性對(duì)照。陽性對(duì)照回收菌量為1.0×104CFU/片~9.0×104CFU/片。取同批次PBS、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng),細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h觀察結(jié)果;白色念珠菌培養(yǎng)72h觀察結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次,計(jì)算抑菌率。
5.1.2.4結(jié)果判定
抑菌率≥50%~90%,判有抑菌作用;抑菌率≥90%,判有較強(qiáng)抑菌作用。

5.1.3載體抑菌試驗(yàn)
5.1.3.1適用范圍
適用于含溶出性抑菌成分的濕巾、無紡布口罩、衛(wèi)生巾、護(hù)墊、尿布等固體類抑菌產(chǎn)品對(duì)微生物抑菌效果的測定。
5.1.3.2試劑、培養(yǎng)基及器材
見5.1.1.2。
5.1.3.3試驗(yàn)步驟
取試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下,用PBS稀釋至約105CFU/mL~106CFU/mL,制成菌懸液備用。用滅菌剪刀在無菌條件下將試驗(yàn)樣品和對(duì)照樣品分別剪成20mm×30mm樣片備用。試驗(yàn)時(shí)滴加0.1mL菌懸液。對(duì)照樣片染菌前需經(jīng)壓力蒸汽滅菌。取無菌平皿,用無菌鑷子取2片試驗(yàn)樣片,勿重疊,置20℃±1℃水浴5min,在每一樣片上滴加0.1mL試驗(yàn)用菌懸液,立即計(jì)時(shí)。待試驗(yàn)菌與樣片接觸作用至說明書的規(guī)定時(shí)間,分別夾取染菌樣片加于5.0mLPBS試管中,混勻。振蕩洗脫,分別吸取1.0mL樣液,按活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)方法測定存活菌數(shù),每管樣液接種2個(gè)平皿。如平板上生長的菌落數(shù)較多時(shí),可10倍系列稀釋后,再進(jìn)行活菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)。同時(shí)用與試驗(yàn)樣品同質(zhì)材料不含抑菌成分的對(duì)照樣片2片代替試驗(yàn)樣片進(jìn)行試驗(yàn),作為陽性對(duì)照,陽性對(duì)照回收菌量為1.0×104CFU/片~9.0×104CFU/片;取同批次PBS、培養(yǎng)基作陰性對(duì)照。
所有試驗(yàn)樣本和對(duì)照樣本均在36℃±1℃培養(yǎng),細(xì)菌繁殖體培養(yǎng)48h、白色念珠菌培養(yǎng)72h觀察最終結(jié)果。試驗(yàn)重復(fù)3次,計(jì)算抑菌率。
5.1.3.4抑菌率計(jì)算
見式(2)。
5.1.3.5結(jié)果判定
抑菌率≥50%~90%,判有抑菌作用;抑菌率≥90%,判有較強(qiáng)抑菌作用。

5.1.4抑菌環(huán)試驗(yàn)
5.1.4.1適用范圍
適用于含溶出性抑菌物質(zhì),可制成直徑為5mm片狀物的固體抑菌產(chǎn)品的抑菌效果鑒定;也可用于鑒別抗抑菌樣品中是否含有可溶性抑菌物質(zhì)。
5.1.4.2試劑、培養(yǎng)基及器材
游標(biāo)卡尺,其它見5.1.1.2
5.1.4.3試驗(yàn)步驟
將試驗(yàn)菌24h新鮮斜面培養(yǎng)物用PBS洗下,稀釋至5.0×105CFU/mL~5.0×106CFU/mL備用。
抑菌片的制備:溶出性固體抑菌產(chǎn)品,直接制成直徑為5mm,厚度不超過4mm圓片(塊),每4片為一組。陰性對(duì)照樣片的制備:取同種材質(zhì)不含抑菌成分的樣本,制成與試驗(yàn)組大小相同的圓片(塊)。
用無菌棉拭子蘸取濃度為5.0×105CFU/mL~5.0×106CFU/mL試驗(yàn)菌懸液,在適宜的培養(yǎng)基平板表面均勻涂抹3次。每涂抹1次,平板應(yīng)轉(zhuǎn)動(dòng)60°,最后將棉拭子繞平板邊緣涂抹一周。蓋好平皿,置室溫干燥5min。
每次試驗(yàn)貼放1個(gè)染菌平板,每個(gè)平板貼放4片試驗(yàn)樣片,1片陰性對(duì)照樣片,共5片。用無菌鑷子取樣片貼放于平板表面,陰性對(duì)照樣片貼于平板中心位置,試驗(yàn)樣片貼于四周,貼放好后,用無菌鑷子輕壓樣片,使其緊貼于平板表面。各樣片中心之間相距25mm以上,與平板的周緣相距15mm以上。蓋好平板,置36℃±1℃培養(yǎng)16h~18h觀察結(jié)果,試驗(yàn)重復(fù)3次。
用游標(biāo)卡尺測量抑菌環(huán)的直徑(包括貼片)并記錄,測量抑菌環(huán)時(shí),應(yīng)選均勻而完全無菌生長的抑菌環(huán)進(jìn)行,測量其直徑應(yīng)以抑菌環(huán)外沿為界。
5.1.4.4結(jié)果判定
陰性對(duì)照樣片應(yīng)無抑菌環(huán)產(chǎn)生,試驗(yàn)樣品抑菌環(huán)直徑>7mm者,判為有抑菌作用;抑菌環(huán)直徑≤7mm者,判為無抑菌作用。
3次重復(fù)試驗(yàn)(共12個(gè)樣片)均有抑菌作用,則判為合格。

5.1.5浸漬抑菌試驗(yàn)
5.1.5.1適用范圍
適用于溶出性抑菌織物(如抑菌毛巾、口罩、內(nèi)衣等)抑菌效果的測定。
5.1.5.2試劑、培養(yǎng)基及器材
5.1.5.2.1試驗(yàn)菌株見5.1.1.2.1
5.1.5.2.2試樣
在距試樣布邊10cm以上、離布端1m以上部位,剪取直徑為5cm的圓形試樣若干,取3份試樣分別裝于3個(gè)錐形瓶中,蓋好瓶口備用(需用試樣數(shù)量要根據(jù)纖維類別及織物織法而定,以能吸收1mL菌液且錐形瓶中不留殘液為度)。另同法剪取與試樣相同材質(zhì)但不含抑菌劑對(duì)照織物若干,取2份分別裝于2個(gè)錐形瓶中,蓋好瓶口,121℃滅菌15min備用。
5.1.5.2.3試劑和培養(yǎng)基
0.03mol/LPBS(pH7.2~7.4),肉湯培養(yǎng)基、營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、沙氏培養(yǎng)基。
5.1.5.2.4菌懸液的制備
用接種環(huán)將保存的菌種以劃線法接種到營養(yǎng)瓊脂平板,36℃±1℃培養(yǎng)24h,取典型的菌落移種到含肉湯培養(yǎng)基的錐形瓶中,36℃±1℃培養(yǎng)24h,用肉湯對(duì)培養(yǎng)液進(jìn)行系列稀釋,使菌懸液的含菌量為1.0×105CFU/mL~5.0×105CFU/mL。
5.1.5.3試驗(yàn)步驟
分別取1mL菌懸液加入2份準(zhǔn)備好的錐形瓶內(nèi)試樣和1份對(duì)照織物上,確保其均勻分布,且錐形瓶中不留多余液,封好瓶口,以防蒸發(fā)造成細(xì)菌死亡。分別在一個(gè)盛有已接種菌懸液的試樣和對(duì)照織物的錐形瓶中加入100mLPBS,置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細(xì)菌,分別吸取1.0mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個(gè)平皿,作為“0”接觸時(shí)間樣本和對(duì)照織物上的細(xì)菌數(shù)。
將另一個(gè)裝有已接種菌懸液試樣的錐形瓶于36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h,加入100mLPBS,置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細(xì)菌,分別吸取1.0mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個(gè)平皿,作為試驗(yàn)組。
陰性對(duì)照組,試樣不接種菌懸液,在“0”接觸時(shí)間加入100mLPBS,置渦旋振蕩器上振蕩1min取樣,接種平皿。
陽性對(duì)照組,另取1個(gè)裝有對(duì)照織物的錐形燒瓶,接種1mL菌懸液后,在36℃±1℃培養(yǎng)20h±2h,加入100mLPBS,置渦旋振蕩器上振蕩1min洗滌細(xì)菌,分別吸取1.0mL樣液或10倍系列稀釋液接種2個(gè)平皿。將陰性和陽性對(duì)照樣本與試驗(yàn)組樣本一并放36℃±1℃培養(yǎng)48h,計(jì)數(shù)菌落數(shù),試驗(yàn)重復(fù)3次。
5.1.5.4結(jié)果判定
試驗(yàn)成立條件要求:“0”接觸時(shí)間對(duì)照織物的平均回收菌量為1×103CFU/mL~5×103CFU/mL;陰性對(duì)照應(yīng)無菌生長,陽性對(duì)照菌數(shù)比0接觸時(shí)間的菌數(shù)明顯增加。
各次試驗(yàn)的抑菌率均≥50%,即可判定該樣片具有抑菌作用。

5.1.6滯留抑菌效果試驗(yàn)
5.1.6.1適用范圍
適用于有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液類抑菌產(chǎn)品的滯留抑菌效果鑒定。
5.1.6.2試劑、培養(yǎng)基及試驗(yàn)器材
試驗(yàn)菌株:金黃色葡萄球菌(ATCC27217)
試驗(yàn)產(chǎn)品:試驗(yàn)品為25套按順序編號(hào)的樣品。每套2瓶,一瓶為測試樣品,另一瓶為不含抗(抑)菌劑的對(duì)照樣品。
不含抑菌劑的用品25瓶(試驗(yàn)調(diào)整階段用)。
胰蛋白酶大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)、胰蛋白酶大豆瓊脂培養(yǎng)基(TSA)、羊血、經(jīng)脫纖維處理、0.075mol/L的磷酸鹽緩沖液、70%酒精、金屬筒(直徑2.2cm、高度3cm)、一次性接種環(huán)(直徑4mm)、小塑料碗(直徑2.2cm,高2.5mm,)、膠帶(Darapore,3M公司生產(chǎn))、尼龍刮菌棒、聚乙二醇單辛基苯基醚(曲拉通X-100;Triton-X100)500mL、外用抗生素軟膏、玻璃彎棒、皮膚消毒劑等。
5.1.6.3試驗(yàn)步驟
5.1.6.3.1調(diào)整階段
試驗(yàn)開始前7d至14d,受試者使用不含抗(抑)菌成分的香皂、洗發(fā)水和沐浴液進(jìn)行日常的洗手、洗澡,此階段持續(xù)至少7d,但不超過14d。
5.1.6.3.2清洗階段
清洗階段共3d,受試者每天用有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液類樣品清洗一側(cè)前臂,用對(duì)照樣品清洗另一側(cè)前臂,清洗過程如下:
先清洗左臂,用水溫為35℃~37℃的流動(dòng)水潤濕前臂內(nèi)側(cè);取樣液3mL于手心中;從手腕至臂肘上下涂擦60s;用流動(dòng)的清水沖洗前臂15s,不要搓擦;用紙巾沾干前臂,不要搓擦;用不含抑菌成分的對(duì)照樣品重復(fù)以上步驟清洗右臂;按上面所描述的試驗(yàn)步驟每日清洗前臂3次,每次間隔至少1h,在最后一次清洗之后,需記錄好時(shí)間,在12h之后,進(jìn)行滯留效果檢測。在第9次清洗前臂以后,受試者不能洗澡、淋浴或洗凈前臂,直到試驗(yàn)結(jié)束。
5.1.6.3.3試驗(yàn)階段
最后一次清洗后的12h或24h,將在受試者每只前臂上劃出一個(gè)試驗(yàn)區(qū),對(duì)試驗(yàn)區(qū)進(jìn)行接種、封包和回收存活細(xì)菌,具體步驟如下:
將金黃色葡萄球菌(ATCC27217)連續(xù)轉(zhuǎn)種3代,取第3代培養(yǎng)物接種于胰蛋白大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)中,在36℃±1℃的條件下培養(yǎng)20h±2h。然后用TSB適當(dāng)稀釋菌懸液,使菌懸液濃度約為108CFU/mL~109CFU/mL。
接種:在受試者的每只前臂中間部位(不要在手腕和肘皺褶處),用帶有印墨直徑為3.00cm的玻璃量筒扣在皮膚上,劃分出一個(gè)試驗(yàn)區(qū)。使用加樣器取10μL上述菌懸液,接種于前臂試驗(yàn)區(qū)(菌落數(shù)為106CFU/試驗(yàn)區(qū)~107CFU/試驗(yàn)區(qū)),用一次性接種環(huán),把接種物涂成一圓形,使其與試驗(yàn)區(qū)邊緣應(yīng)有4mm~5mm的距離。
封包:細(xì)菌接種后立即用小塑料碗扣于染菌區(qū)上面,再用膠帶將小塑料碗固定在皮膚上,記錄封包的時(shí)間。
回收存活細(xì)菌:接種后2h±5min對(duì)前臂上接種的區(qū)域進(jìn)行取樣。將金屬筒放置于試驗(yàn)區(qū)中間部位,不要接觸到蓋有印墨的邊緣。將1mL含0.1%Triton-X100的0.075mol/L磷酸鹽緩沖液吸移至金屬筒內(nèi),用尼龍刮菌棒刮洗金屬筒罩住區(qū)域內(nèi)的皮膚60s,將筒內(nèi)液體吸移至試管內(nèi),再加1mL含0.1%TritonX-100的0.075mol/L磷酸鹽緩沖液,對(duì)該區(qū)域內(nèi)的皮膚進(jìn)行第二次刮洗30s,將第二次擦洗的液體,注入含第一次刮洗液體的試管中。
實(shí)驗(yàn)區(qū)試驗(yàn)后的消毒處理:對(duì)抑菌樣品組清洗后的實(shí)驗(yàn)區(qū)采樣之后,需用70%的酒精對(duì)實(shí)驗(yàn)區(qū)進(jìn)行消毒。然后對(duì)無抑菌成分的對(duì)照組清洗后的實(shí)驗(yàn)區(qū)以同樣方法進(jìn)行采樣、消毒。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,用皮膚消毒劑對(duì)兩只前臂進(jìn)行消毒處理,處理后清水沖洗,擦干,再涂少量的抗生素軟膏。
接種與培養(yǎng):對(duì)每一個(gè)取樣進(jìn)行接種,以0.0375mol/L磷酸鹽緩沖液對(duì)樣品進(jìn)行10倍系列稀釋,選適當(dāng)稀釋度取0.1mL接種于2個(gè)含5%羊血的TSA平板表面,用玻璃彎棒涂勻,在36℃±1℃的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h±4h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)。
以試驗(yàn)同批次的稀釋液、培養(yǎng)基等分別設(shè)陰性對(duì)照。
5.1.6.4判定標(biāo)準(zhǔn)
各次試驗(yàn)陰性對(duì)照菌無菌生長。實(shí)驗(yàn)不得少于16人次,抑菌率均≥50%,可判定該產(chǎn)品在規(guī)定的時(shí)間內(nèi)有滯留抑菌作用。

5、評(píng)價(jià)方法
4、評(píng)價(jià)方法的選擇原則
4.1抗菌試驗(yàn)與抑菌試驗(yàn)區(qū)別
抗菌試驗(yàn):測定抗菌產(chǎn)品對(duì)細(xì)菌和真菌的抗菌作用,試驗(yàn)過程中需要用中和劑終止殺菌作用。
抑菌試驗(yàn):測定抑菌產(chǎn)品對(duì)細(xì)菌和真菌的抑菌作用,試驗(yàn)過程中不需要使用中和劑終止抑菌作用。
4.2根據(jù)產(chǎn)品性能選擇合適的評(píng)價(jià)方法
4.2.1抑菌效果評(píng)價(jià)方法的選擇原則
抑菌類產(chǎn)品選擇抑菌效果評(píng)價(jià)方法。液體抑菌產(chǎn)品選擇懸液定量抑菌試驗(yàn),膏體或半固體凝膠類、黏稠狀抑菌產(chǎn)品選擇載體浸泡定量抑菌試驗(yàn),濕巾類或其他自身含有抑菌成分的產(chǎn)品選擇載體抑菌試驗(yàn),肥皂類固體抑菌產(chǎn)品選擇抑菌環(huán)試驗(yàn),含有可溶性抑菌成分的紡織品選擇浸漬抑菌試驗(yàn),含有持續(xù)抑菌作用的抑菌洗液選擇滯留抑菌試驗(yàn)。
4.2.2抗菌效果評(píng)價(jià)方法的選擇原則
抗菌類產(chǎn)品選擇抗菌效果評(píng)價(jià)方法。液體抗菌產(chǎn)品選擇懸液定量殺菌試驗(yàn),凝膠狀或膏狀抗菌產(chǎn)品選擇載體浸泡定量殺菌試驗(yàn),濕巾類或其他自身含有抗菌成分的產(chǎn)品選擇載體殺菌試驗(yàn),含有可溶性抗菌成分的紡織品選擇浸漬抗菌試驗(yàn)。
含有不可溶抗菌成分的紡織品、無紡布、纖維等,經(jīng)鑒別不含可溶性抗抑菌成分后,采用燒瓶振蕩試驗(yàn)。
含有不可溶抗菌成分的瓷磚、塑料、金屬、涂料等,采用貼膜試驗(yàn);對(duì)于涂于表面,干燥后具有持續(xù)抗菌作用的產(chǎn)品,進(jìn)行持續(xù)抗菌試驗(yàn)。

3、術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本文件。
3.1抗菌
采用化學(xué)或物理方法殺滅或妨礙細(xì)菌生長繁殖,可減少其數(shù)量以及活性的過程。
3.2抑菌
采用化學(xué)或物理方法抑制或妨礙細(xì)菌生長繁殖及其活性的過程。
3.3持續(xù)抗菌作用
具有抗菌作用的消毒產(chǎn)品涂于物體表面,持續(xù)7d以上仍具有殺滅或妨礙細(xì)菌生長繁殖作用。
3.4中和劑
在殺滅微生物試驗(yàn)中,用以消除試驗(yàn)微生物與消毒劑的混懸液中,以及微生物表面上殘留的消毒劑,使其失去對(duì)微生物抑制和殺滅作用的試劑。

2、規(guī)范性引用文件
下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。
GB15979一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)
FZ/T73023抗菌針織品
消毒技術(shù)規(guī)范(2002版)衛(wèi)生部(衛(wèi)法監(jiān)發(fā)〔2002〕282號(hào))

1、范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了抗菌和抑菌評(píng)價(jià)方法的選擇原則和使用。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于具有抗菌和(或)抑菌功能產(chǎn)品的抗菌、抑菌效果的鑒定。

抗抑菌產(chǎn)品檢測新標(biāo)準(zhǔn)WST650-2019抗菌和抑菌效果評(píng)價(jià)方法于2019年7月1日起實(shí)施,健明迪檢測,準(zhǔn)確把握消毒政策要求變化,提供抗抑菌劑等消毒產(chǎn)品產(chǎn)品檢測備案,具備CNAS與CMA雙資質(zhì)認(rèn)可,專業(yè)權(quán)威第三方檢測機(jī)構(gòu)。下面為抗抑菌劑檢測備案新政策WST 650-2019簡要內(nèi)容。

WST650-2019抗菌和抑菌效果評(píng)價(jià)方法
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